小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞266-6的培養(yǎng)和鑒定方法如下:
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:使用DMEM培養(yǎng)基,并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的青霉素/鏈霉素(P/S)。
培養(yǎng)條件:細(xì)胞需要在含有95%空氣和5%二氧化碳(CO?)的孵箱中,于37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
傳代培養(yǎng):266-6細(xì)胞易聚團(tuán),每次傳代均要保證胰酶消化充分,用含血清培養(yǎng)基終止消化,收集細(xì)胞后離心,收集細(xì)胞沉淀。細(xì)胞沉淀先使用3mL巴氏管輕柔吹打混勻,充分制備成單細(xì)胞懸液,再進(jìn)行分瓶傳代。建議的傳代比例為1:2至1:3,每周進(jìn)行23次傳代。每次傳代,均使用新的培養(yǎng)容器,培養(yǎng)容器二次使用易導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。
細(xì)胞復(fù)蘇:將含有細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入適量培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基后吹勻,然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞凍存:先將細(xì)胞消化并收集,離心后棄上清,加入凍存液,重懸細(xì)胞,并分裝到凍存管,凍存密度0.81.5×10?細(xì)胞/mL。將凍存管放入程序降溫盒,并放到80℃冰箱,過夜后將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮保存。
鑒定方法
形態(tài)學(xué)鑒定:在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),266-6細(xì)胞呈現(xiàn)上皮細(xì)胞樣的形態(tài)特性,多為多邊形或立方體形,貼壁生長。
分子生物學(xué)鑒定:可通過檢測細(xì)胞中特定基因的表達(dá)來鑒定,如檢測彈性蛋白酶I/新霉素轉(zhuǎn)基因的表達(dá)情況,因?yàn)?66-6細(xì)胞帶有該轉(zhuǎn)基因。還可以檢測多種消化酶mRNA的表達(dá),266-6細(xì)胞保留部分分化的表型,會表達(dá)可檢測水平的多種消化酶mRNA。
功能學(xué)鑒定:利用266-6細(xì)胞對某些物質(zhì)有反應(yīng)的特性進(jìn)行鑒定,如該細(xì)胞對卡巴膽堿和縮膽囊素有反應(yīng),但對P物質(zhì)、促胰液素或血管活性腸肽(VIP)沒有反應(yīng),可通過給予相應(yīng)刺激物,觀察細(xì)胞的反應(yīng)來輔助鑒定。